패브리병(Fabry) 진단을 위한 혈장 중 Globotriaosylceramide (Gb3)의 탠덤매스 분석법 개발과 임상 응용

• 영문명: Determination of plasma C16-C24 globotriaosylceramide (Gb3) isoforms by tandem mass spectrometry for diagnosis of Fabry disease
• 발행기관: 대한의학유전학회
• 저자명: 윤혜란(Hye-Ran Yoon) 조경희(Kyunghee Cho) 유한욱(Han-Wook Yoo) 최진호(Jin-Ho Choi) 이동환(Dong Hwan Lee) Kate Zhang, Joan Keutzer
• 간행물 정보: 『대한의학유전학회지』제4권 제1호, 45~52쪽, 전체 8쪽
• 주제분류: 의약학 > 기타의약학
• 파일형태: PDF
• 발행일자: 2007.06.30

국문 초록

목적: 패브리병은 X-linked 지질 축적 질환으로 α-galactosidase A (α-Gal A)의 결손으로 인해 스핑고당지질인 Gb3의 세포내 축적을 일으키는 병이다. 혈장 중 Gb3 측정은 패브리병 환자의 효소대체요법 후의 모니터링이나 진단에 임상적 의의가 크므로 ESI-MS/MS를 이용한 시료 전처리를 위한 노동력이 덜 들면서 간단, 신속, 고감도로 정량할 수 있는 혈장 중 Gb3분석법을 개발하고자 하였다. 방법 : 혈장을 디옥산으로 50배 희석하여 vortex-mix 및 원심분리를 거쳐 Gb3의 추출 및 분리를 수행한다. 이 때 내부표준액인 C17:0 Gb3를 혈장에 처음부터 첨가한다. 희석과 원심분리된 혈장은 가드컬럼을 통하여 ESI-MS/MS의 다중성분 모니터링 모드에서 분석하여 내부표준액에 대한 8종 Gb3 isoform의 피크면적비를 이용하여 정량한다. 결과 : 혈장의 바탕성분 하에서 8종의 Gb3 isoform이 완전히 잘 분리됨을 확인할 수 있었다. 혈장 중의 8종의 Gb3 isoform 중 50% 이상 차지하는 종류는 C16:0 Gb3 임이 확인되었다. Gb3 isoform이 직선성을 이루는 농도 범위는 0.001-1.0 ㎍/mL이었다. 검출한계(S/N=3)는 C16:0 Gb3의 경우 0.001 ㎍/mL 이었고 정량한계는 0.01 ㎍/mL 이었으며 회수율의 일내재현성(정확도 87-108%와 정밀도 7% 이하)과 일간재현성(정확도 87-110%와 정밀도 13% 이하)은 매우 양호하였다. 결론 : 본 연구에서 개발된 Gb3 분석법은 신속, 정확, 간편하게 패브리병의 1차 스크리닝이나 효소대체요법 전후의 모니터링 및 진단에 유용하게 적용될 수 있을것이다.

영문 초록

Purpose : A simple, rapid, and highly sensitive analytical method for Gb3 in plasma was developed without labor-extensive pre-treatment by electrospray ionization M S/M S (ESI-M S/M S). Measurement of globotriaosylceramide (Gb3, ceramide trihexoside) in plasma has clinical importance for monitoring after enzyme replacement therapy in Fabry disease patients. The disease is an X-linked lipid storage disorder that results from a deficiency of the enzyme α-galactosidase A (α-Gal A). The lack of α-Gal A causes an intracellular accumulation of glycosphingolipids, mainly Gb3. Methods : Only simple 50-fold dilution of plasma is necessary for the extraction and isolation of Gb3 in plasma. Gb3 in diluted plasma was dissolved in dioxane containing C17:0 Gb3 as an internal standard. After centrifugation it was directly injected and analyzed through guard column by in combination with multiple reaction monitoring mode of ESI-M S/M S. Results : Eight isoforms of Gb3 were completely resolved from plasma matrix. C16:0 Gb3 occupied 50 % of total Gb3 as a major component in plasma. Linear relationship for Gb3 isoforms was found in the range of 0.001-1.0 ㎍/mL. The limit of detection (S/N=3) was 0.001 ㎍/mL and limit of quantification was 0.01 ㎍/mL for C16:0 Gb3 with acceptable precision and accuracy. Correlation coefficient of calibration curves for 8 Gb3 isoforms ranged from 0.9678 to 0.9982. Conclusion : This quantitative method developed could be useful for rapid and sensitive 1st line Fabry disease screening, monitoring and/or diagnostic tool for Fabry disease.

목차

서론

실험 방법

결과 및 고찰

결론

감사의 글

요약

참고문헌

키워드

Globotriaosylceramide (Gb3) M S/ M S Fabry disease Quantification diagnosis