Ehrlich 암세포에 대한 Acriflavine-Guanosine 복합제(AG60)의 항암효과

• 영문명: Anticancer Effect of AG60 (Acriflavine-Guanosine Compound) on the Ehrlich Cancer Cells : Light Microscopic, Autoradiographic and Electron Microscopic Study
• 발행기관: 대한해부학회
• 저자명: 안의태(E-Tay Ahn) 고정식(Jeong-Sik Ko) 김형진(Hyung-Jin Kim) 김상건(Sang-Geon Kim) 이경영(Kyung-Yung Lee) 강종구(Jong-Koo Kang) 유보림(Bo-Im Yoo) 정영신(Young-Shin Chung) 홍은경(Eun-Kyung Hong) 한영복(Young-Bok Han)
• 간행물 정보: 『대한해부학회지』제32권 제2호, 117~134쪽, 전체 18쪽
• 주제분류: 의약학 > 의학일반
• 파일형태: PDF
• 발행일자: 1999.04.30

국문 초록

세계적으로 암을 퇴치하기 위하여 노력을 집중하고 있으나 암으로 인한 사망자수가 오히려 늘고 있어서 새로운 약품의 개발과 대책이 시급하다. 최근 국내에서 개발되어 동물실험암에서 높은 치료효과를 보이면서도 독성이 적은 것으로 알려진 AG60(acriflavine-guanosine 복합제)의 항암기전을 밝히기 위해 형태학적연구를 시행하였다. ICR 마우스의 샅굴부위 피부밑조직에 107개의 Ehrlich 암세포를 이식시킨 후 실험목적에 따라 5mg/kg~30 mg/kg의 AG60 을 피부밑조직에 주사한 후 1~2주일 후에 광학 및 전자현미경관찰과 3H-thymidine 자기방사법연구 등을 시행하여 아래와 같은 결과를 얻었다. 1. AG60 10 mg/kg 또는 30 mg/kg을 격일 간격으로 주사한 후 14일째에 광학현미경관찰에서 암덩어리의 크기는 조금 줄어 들었으나 세포는 대부분 변성되어서 활성을 띠는 암세포는 소수에 불과했다. 2. AG60 30 mg/kg을 격일 간격으로 주사하고 14일 후에 전자현미경관찰에서 많은 암세포들이 거대세포의 증가, 세포핵과 핵소체의 분획과 변성, 세포핵과 세포질의 농축, 핵과 세포질의 분엽, 세포사이 분리 등의 형태 변화를 보여서 전형적인 apoptosis가 매우 증가한 것을 알 수 있었다. 거대세포의 증가는 암세포 상호간에 emperipolesis가 증가함에 따른 것으 로 생각된다. 3. 3H-thymidine을 섭취시키고 자기방사법을 시행하여 관찰한 결과 AG60 5 mg/kg 또는 30 mg/kg을 7일동안 주사한 동물 의 암조직에서는 thymidine방사과립의 함량이 90% 내외까지 심하게 감소되었다. 4. 5 mg/kg 투여군과 30 mg/kg 투여군 사이에 방사성지수에서 큰 차이가 없었으므로 훨씬 적은 용량으로 장기간 사용할 수 있는 방법의 모색이 필요하다고 생각된다. 5. 동위원소실험과 세포변성형태를 비교해 볼 때 AG60은 acriflavine의 DNA, RNA 및 단백질합성 억제력과 guanosine의 상승작용으로 더욱 큰 항암능력을 보인 것으로 생각되었다. 본 형태학적 실험결과로 볼 때 이상적인 항암제의 조건인 암세포의 조절, 암의 안정화, 삶의 질 향상, 생명연장, 약물에 의한 암예방효과 등의 조건을 충족시킬 수 있는 면에서 AG60은 높은 평가를 얻을 것으로 본다.

영문 초록

To evaluate the effect and working mechanism of a newly developed anti-cancer drug, AG60 (acriflavine-guanosine compound, Taerim Pharm. Co. Seoul, Korea), histotologic, autoradiographic and electron microscopic studies were carried out. For the histologic study, each Ehrlich carcinoma cells (107 cells)-inoculated mouse was subcutaneously injected with saline (0.2 ml), 10 mg/kg of AG60, or 30 mg/kg of AG60, every other day, respectively. Animals were sacrified on the 14th day from the first injection, and tumor masses were fixed in 10% formalin solution. Tissue sections of the tumor were stained with hematoxylin and eosin. For the electron microscopic study, Ehrlich carcinoma (107 cells)-inoculated mice were subcutaneously injected every other day with saline (0.2ml) or 30 mg/kg of AG60, respectively. The day after 7th injection (14th day), animals were sacrified, small piece of tumor masses were fixed in 2.5% glutaraldehyde-1.5% paraformaldehyde solution followed by fixation in 2% osmium tetroxide solution. Ultrathin sections were counter stained with uranyl acetate-lead citrate solutions, and observed with JEM 100CX electron microscope. For the autoradiographic study, each Ehrlich carcinoma (107 cells)-inoculated mouse was injected every day with 0.2ml of saline, 5 mg/kg of AG60, or 30 mg/kg of AG60, respectively. The day following the last injection, each animal was given a single dose of 0.7 μCi/g of methyl-3H-thymidine (Amersham Lab., England) through the tail vein. Seventy minutes after the thymidine injection, animals were sacrified, tumor masses were collected and fixed in 10% neutral formalin. Tissue blocks were washed, dehydrated, embedded and cut in 6 μm-thick sections. Deparaffinzied sections were dipped in the autradiographic emulsion E1 (Amersham Lab., England) and dried and stocked in the dark room. Filmed sections were exposured five weeks in the dark room, and were developed in the developer. Labeled indices (mean number of labeled cells per 100 cancer cells) and labeled grain indices (mean number of labeled silver grains per one cancer cell, and total granule numbers per every 100 cancer cell) were observed and calculated. The results were as follows : 1. On histological study, massive apoptosis were occured following the injection of AG60. Only small number of live cancer cells were observed. 2. On electron microscopic study, massive apoptotic figures including fragmentation of nuclei and cytoplasms, multiple nucleoli, condensation of nucleus and cytoplasm, deep invaginations and microcleft formations of nuclei, margination of heterochromatin along the inner nuclear membrane and microcleft , etc. were noticed. Giant cells represent the “tumor cell-tumor cell emperipolesis”, and many of them seem to be in process of “cytolytic emperipolesis”. 3. On autoradiographic study, labeled grains of 3H-thymidine were suppressed to only 11%~5% of control cancer cells following AG60 administrations. Discussed on the above experiments, it is suggested that severe suppression of DNA, RNA and protein syntheses by AG60 induce massive apoptosis of cancer cells. AG60 is expected as one of most effective anticancer drugs for the cytostatic therapy, the disease stabilization, the improved quality of life, the prolongation of life, and possibly the chemoprevention.

키워드

Acriflavine Guanosine Ehrlich 암세포 자기방사법 전자현미경 Ehrlich Cancer cell Autoradiography Electron Microscopy