생쥐 대동맥에서 혈관 내피세포 및 민무늬근육세포의 효과적 분리

• 영문명: An Effective Isolation of the Vascular Endothelial and Smooth Muscle Cells from the Mouse Aorta
• 발행기관: 대한해부학회
• 저자명: 김경곤(Kyung Gon Kim) 성언기(Eon-Gi Sung) 김주영(Joo-Young Kim)
• 간행물 정보: 『대한해부학회지』제42권 제2호, 93~104쪽, 전체 12쪽
• 주제분류: 의약학 > 의학일반
• 파일형태: PDF
• 발행일자: 2009.04.30

국문 초록

특정 유전자들이 없는 생쥐 또는 정상적인 생쥐의 대동맥으로부터 각각 분리된 세포들을 이용하여 서로 비교분석하면 죽상경화증 등의 질병 기전을 밝히는 데 유용한 모델로 쓰일 수 있다. 본 실험에서는 4~6주된 C57BL/6J 정상 생쥐 대동맥에서 혈관 내피세포와 민무늬근육세포를 효과적으로 분리하는 방법을 확립하기 위해서, 바깥막만을 제거하여 내막과 중간막으로 구성된 대동맥조직을 얻었다. 이 조직을 제1형 또는 제2형 아교질분해효소용액으로 처리하여 각각에서 분리된 내피세포와 민무늬근육세포의 특성을 조사하였다. 이들 세포의 성장 양상은 도립현미경으로 관찰하였다. 내피세포의 표지자인 CD31과 민무늬근육세포의 표지자인 α-smooth muscle actin은 공초점현미경으로 검경하였고, 효소용액의 종류에 따른 이들 세포의 분리 효과는 전체세포 수 중각 표지자에 양성반응을 보인 세포 수를 백분율로 표시하였다. 제1형 아교질분해효소용액으로 분리된 내피세포들은 배양 10일에 배양용기의 70~80%를 세포들이 덮었고, 제2형 아교질분해효소용액의 경우 40~50%가 세포들로 덮였다. 민무늬근육세포들은 배양 13일에 제1형 및 제2형 아교질분해효소용액 모두에서 배양용기의 70~80%가 세포들로 덮였다. 제1형 아교질분해효소용액으로 분리된 세포 중 CD31 양성반응인 내피세포의 백분율은 91.1±2.865%**였고, 제2형 아교질분해효소용액을 처리한 경우는 86.4±3.641%였다(**p⁄0.05, n=5). α-smooth muscle actin 양성반응인 민무늬근육세포의 백분율은 제1형 아교질분해효소용액을 사용하였을 경우 87.9±5.713%, 제2형 아교질분해효소용액의 경우 86.6±4.778%로 두 군 사이에 유의한 차이가 없었다. 이상을 요약하면 대동맥조직을 제2형 아교질분해효소용액으로 처리하는 것에 비해 제1형 아교질분해 효소용액을 사용하는 것이 혈관내피세포를 분리하는 데 있어 더욱 효과적이었다.

영문 초록

The mechanism of the disease such as artherosclerosis is easily elucidated by the comparison among cells isolated from each aorta of knockout mouse and wild type mouse, respectively. This study was aimed at effectively harvesting the endothelial and smooth muscle cells from 4~6 weeks old wild type C57BL/6J mouse aorta. The tunica adventitia was completely removed to get the aortic tissues only consisting of the tunica intima and the tunica media under the stereoscope. These aortic tissues were treated with type I collagenase or type II collagenase solution, respectively, and then the endothelial or smooth muscle cell was isolated. CD31 marker of the endothelial cell and α-smooth muscle actin marker of the smooth muscle cell were identified with confocal microscope. The percentages of the labelled cells by each marker represented the extent of purification of endothelial or smooth muscle cells, respectively, for harvested cells according to the collagenase solutions. 70~80% of culture vessel was covered with the endothelial cells 10 days after the treatment of the type I collagenase solution, while 40~50% of culture vessel covering with the cells after the treatment of the type II collagenase solution. 70~80% of culture vessel was covered with the smooth muscle cell regardless of the type of the collagenase solution on the 13th day. Percentages of the CD31 positive cells after the treatment with the type I or the type II collagenase solution was 91.1±2.865%** and 86.4±3.641%, respectively (**p⁄0.05, n=5). Percentages of the α-smooth muscle actin labelled cells after the treatment with the type I or the type II collagenase solution were 87.9±5.713% and 86.6±4.778%, respectively, and these values were not significantly different. Taken together, the aortic tissues using the type I collagenase solution comparing with using the type II collagenase solution were much more effective in the isolation of the endothelial cells.

키워드

Endothelial cells Smooth muscle cells Mouse aorta Type I collagenase solution Type II collagenase solution 혈관내피세포 혈관민무늬근육세포 생쥐 대동맥 제1형 아교질분해효소용액 제2형 아교질분해효소용액